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        illumina測序儀的測序原理是什么?

        發布時間:2020-11-09瀏覽:497次

          illumina測序儀是利用其核心技術“DNA簇”和“可逆性末端終結”,實現自動化樣本制備及基因組數百萬個堿基大規模平行測序。

          
          illumina測序原理:
          
          illumina測序采用邊合成邊測序技術(Sequencingbysythesis,SBS),步驟如下:
          
          步驟一:建庫,在DNA的片段兩端加上序列已知的通用接頭構建文庫,文庫加載到測序芯片Flowcell。
          
          步驟二:簇生成。文庫兩端的已知序列與Flowcell基底上的Oligo序列互補,每條文庫片段都經過橋式PCR擴增形成一個簇。
          
          步驟三:簇擴增及測序。與步驟二同時進行。即在堿基延伸過程中,每個循環反應只能延伸一個正確互補的堿基,根據四種不同的熒光信號確認堿基種類,保證終的核酸序列質量,經過多個循環后,完整讀取核酸序列。
          
          一些常用基本概念的介紹:
          
          1、flowcell是指illumina測序時,測序反應發生的位置,1個flowcell含有8條lane。
          
          2、lane每一個flowcell上都有8條泳道,用于測序反應,可以添加試劑,洗脫等等。
          
          3、tile每一次測序熒光掃描的小單位。
          
          4、reads指測序的結果,1條序列一般稱為1條reads。
          
          5、bpbasepair堿基對,用于衡量序列長度。
          
          6、雙端測序只一條序列可能比較長如500bp,我們可以兩端每端各測150bp。
          
          7、junction上面說的雙端測序,中間會留有200bp測不到的東西,我們叫junction。
          
          8、adapter就是測序中需要的一段特定的序列,有類似于引物的功能。
          
          9、primerPCR中的引物。

         

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