illumina測序儀的測序原理是什么？

　　

　　illumina測序原理：

　　

　　illumina測序采用邊合成邊測序技術(Sequencingbysythesis,SBS)，步驟如下：

　　

　　步驟一：建庫，在DNA的片段兩端加上序列已知的通用接頭構建文庫，文庫加載到測序芯片Flowcell。

　　

　　步驟二：簇生成。文庫兩端的已知序列與Flowcell基底上的Oligo序列互補，每條文庫片段都經過橋式PCR擴增形成一個簇。

　　

　　步驟三：簇擴增及測序。與步驟二同時進行。即在堿基延伸過程中，每個循環反應只能延伸一個正確互補的堿基，根據四種不同的熒光信號確認堿基種類，保證終的核酸序列質量，經過多個循環后，完整讀取核酸序列。

　　

　　一些常用基本概念的介紹：

　　

　　1、flowcell是指illumina測序時，測序反應發生的位置，1個flowcell含有8條lane。

　　

　　2、lane每一個flowcell上都有8條泳道，用于測序反應，可以添加試劑，洗脫等等。

　　

　　3、tile每一次測序熒光掃描的小單位。

　　

　　4、reads指測序的結果，1條序列一般稱為1條reads。

　　

　　5、bpbasepair堿基對，用于衡量序列長度。

　　

　　6、雙端測序只一條序列可能比較長如500bp，我們可以兩端每端各測150bp。

　　

　　7、junction上面說的雙端測序，中間會留有200bp測不到的東西，我們叫junction。

　　

　　8、adapter就是測序中需要的一段特定的序列，有類似于引物的功能。

　　

　　9、primerPCR中的引物。